rpmjResearch'n Practical Medicine JournalResearch and Practical Medicine Journal2410-1893"QUASAR", LLC10.17709/2410-1893-2021-8-2-1rpmj-718Research ArticleОригинальные статьи. Онкология, лучевая терапияOriginal Articles. ОncologyДиагностическая информативность генетических методов и жидкостной цитологии для диагностики предраковых и злокачественных заболеваний шейки маткиDiagnostic informative value of liquid-based cytology optimized with genetic methods for the differential diagnosis of precancerous and malignant diseases of the cervixhttps://orcid.org/0000-0003-3061-6108КитО. И.KitO. I.

Кит Олег Иванович – член-корр. РАН, д.м.н., профессор, генеральный директор, SPIN: 1728-0329, AuthorID: 343182, ResearcherID: U-2241-2017, Scopus Author ID: 55994103100

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Oleg I. Kit – corr. member of RAS, Dr. Sci. (Med.), professor, general director, SPIN: 1728-0329, AuthorID: 343182, ResearcherID: U-2241-2017, Scopus Author ID: 55994103100

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

https://orcid.org/0000-0002-1397-837XМаксимовА. Ю.MaksimovA. Yu.

Максимов Алексей Юрьевич – д.м.н., профессор, врач-онколог, заместитель генерального директора по перспективным научным разработкам, SPIN: 7322-5589, AuthorID: 710705, Scopus Author ID: 56579049500

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Aleksey Yu. Maksimov – Dr. Sci. (Med.), professor, oncologist, deputy general director for promising scientific developments, SPIN: 7322-5589, AuthorID: 710705, Scopus Author ID: 56579049500

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

https://orcid.org/0000-0003-1484-0580ТимошковаМ. Ю.TimoshkovaM. Yu.

Тимошкова Мария Юрьевна – врач-онколог, младший научный сотрудник испытательного лабораторного центра, SPIN: 5882-7437, AuthorID: 1084821

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Maria Yu. Timoshkova – oncologist, junior researcher, experimental laboratory center, SPIN: 5882-7437, AuthorID: 1084821

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

https://orcid.org/0000-0002-3036-6199ЛукбановаЕ. А.LukbanovaE. A.

Лукбанова Екатерина Алексеевна – биолог, научный сотрудник испытательного лабораторного центра, SPIN: 4078-4200, AuthorID: 837861, Scopus Author ID: 57215860146

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Ekaterina A. Lukbanova – biologist, researcher, at the experimental laboratory center, SPIN: 4078-4200, AuthorID: 837861, Scopus Authors ID: 57215860146

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

katya.samarskaja@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7919-6111ПетрусенкоН. А.PetrusenkoN. A.

Петрусенко Наталья Александровна – младший научный сотрудник лаборатории молекулярной онкологии, SPIN: 5577-3805, AutorID: 960639

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Natalia A. Petrusenko – junior researcher, laboratory of molecular oncology, SPIN: 5577-3805, AutorID: 960639

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

https://orcid.org/0000-0002-5221-3644ПотемкинД. С.PotemkinD. S.

Потемкин Дмитрий Сергеевич – младший научный сотрудник лаборатории молекулярной онкологии, SPIN: 2789-0569, AuthorID: 935975, Scopus Author ID: 57209739974

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Dmitriy S. Potemkin – junior researcher, laboratory of molecular oncology, SPIN: 2789-0569, AuthorID: 935975, Scopus Author ID: 57209739974

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

https://orcid.org/0000-0002-1084-5176ВереникинаЕ. В.VerenikinaE. V.

Вереникина Екатерина Владимировна – к.м.н., врач-онколог, заведующая отделением онкогинекологии, SPIN: 6610-7824, AuthorID: 734269

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Ekaterina V. Verenikina – Cand. Sci. (Med.), oncologist, head of department of oncogynecology, SPIN: 6610-7824, AuthorID: 734269

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

https://orcid.org/0000-0002-9468-134XШевченкоА. Н.ShevchenkoA. N.

Шевченко Алексей Николаевич – д.б.н., профессор, врач-онколог, заведующий отделением онкоурологии, SPIN: 2748-2638, AuthorID: 735424

344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я линия, д. 63

Alexey N. Shevchenko – Dr. Sci. (Med.), professor, oncologist, head of department of oncourology, SPIN: 2748-2638, AuthorID: 735424

63 14 line str., Rostov-on-Don 344037

https://orcid.org/0000-0002-6131-8560КечерюковаМ. М.KecheryukovaM. M.

Кечерюкова Мадина Мажитовна – аспирант, SPIN: 8756-7134, AuthorID: 1028415

344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Madina M. Kecheryukova – postgraduate student, SPIN: 8756-7134, AuthorID: 1028415

29 Nakhichevansky lane, Rostov-on-don, 344022

ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава РоссииРоссияNational Medical Research Centre for Oncology of the Ministry of Health of RussiaRussian FederationФГБОУ ВО «РостГМУ» Минздрава РоссииРоссияRostov State Medical UniversityRussian Federation202120062021821222Copyright © Кит О.И., Максимов А.Ю., Тимошкова М.Ю., Лукбанова Е.А., Петрусенко Н.А., Потемкин Д.С., Вереникина Е.В., Шевченко А.Н., Кечерюкова М.М., 20212021Кит О.И., Максимов А.Ю., Тимошкова М.Ю., Лукбанова Е.А., Петрусенко Н.А., Потемкин Д.С., Вереникина Е.В., Шевченко А.Н., Кечерюкова М.М.Kit O.I., Maksimov A.Y., Timoshkova M.Y., Lukbanova E.A., Petrusenko N.A., Potemkin D.S., Verenikina E.V., Shevchenko A.N., Kecheryukova M.M.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.rpmj.ru/rpmj/article/view/718Цель исследования

Цель исследования. Оценка диагностической информативности генетических методов и жидкостной цитологии для диагностики предраковых и злокачественных заболеваний шейки матки.

Материалы и методы

Материалы и методы. В данное исследование была включена 381 пациентка. Диагностику патологий шейки матки проводили с помощью только жидкостной цитологии и жидкостной цитологии, оптимизированной с помощью генетических методов оценки уровней экспрессии миРНК‑20а, миРНК‑375, миРНК‑21 и -23b. Помимо жидкостной цитологии и генетических методов для верификации диагноза было проведено гистологическое исследование биоматериала. При статистическом анализе использовали методы описательной статистики с расчетом средней величины и стандартной ошибки средней. При сравнении средних величин использовали критерий Манна-Уитни.

Результаты

Результаты. Диагностические результаты жидкостной цитологии совпали с заключением, установленным при гистологическом исследовании у 107 (73,8  %) из 145 больных раком шейки матки (РШМ), у 52 (57,1 %) из 91 пациентки с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями высокой степени (ПИП ВС) и у 30 (65,2 %) из 46 больных с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями низкой степени (ПИП НС). Оптимизация жидкостной цитологии путем оценки экспрессии миРНК‑21 и миРНК23b в цервикальном эпителии позволила повысить диагностическую чувствительность метода с 73,8  % до 80 %, а специфичность с 94,1 % до 97,9 %. Диагностическая чувствительность и специфичность применения жидкостной цитологии для дифференциальной диагностики РШМ и ПИП ВС составили 87 % и 78,8 % соответственно. Оптимизация жидкостной цитологии путем оценки экспрессии миРНК‑20а и миРНК‑375 в цервикальном эпителии для дифференциальной диагностики РШМ и ПИП ВС позволила повысить диагностическую чувствительность стандартного жидкостного цитологического исследования с 87 % до 95,1 %, а специфичность с 78,8 % до 93,9 %.

Заключение

Заключение. В работе были выявлены наиболее информативные пары миРНК цервикального эпителия, анализ экспрессии которых расширил возможности жидкостной цитологии как с точки зрения метода диагностики РШМ, так и с позиции дифференциальной диагностики между РШМ и ПИП ВС.

Purpose of the study

Purpose of the study. Was to assess diagnostic informative value of liquid-based cytology optimized with genetic methods for the differential diagnosis of precancerous and malignant diseases of the cervix.

Materials and methods

Materials and methods. The study included 381 patients. Cervical pathologies were diagnosed with liquid-based cytology only and liquid-based cytology optimized with genetic methods of assessing the expression of miRNA‑20a, miRNA‑375, miRNA‑21 and –23b. Results of liquid-based cytology and genetic methods were verified by histological examination of the material. Statistical analysis was performed using descriptive statistics methods with the calculation of the mean and standard error of the mean. The mean values were compared with the help of the Mann-Whitney test.

Results

Results. Diagnostic results of liquid-based cytology were consistent with histological results in 107 (73.8 %) of 145 cervical cancer (CC) patients, in 52 (57.1 %) of 91 patients with high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL), and in 30 (65.2 %) of 46 patients with low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL). Optimization of liquid-based cytology by assessing the expression of miRNA‑21 and miRNA‑23b in the cervical epithelium improved the diagnostic sensitivity of the method from 73.8 % to 80 %, and its specificity from 94.1 % to 97.9 %. The diagnostic sensitivity and specificity of liquid-based cytology for differential diagnosis of CC and HSIL was 87 % and 78.8 %, respectively. Optimization of liquidbased cytology by assessing the expression of miRNA‑20a and miRNA‑375 in the cervical epithelium for the differential diagnosis of CC and HSIL improved the diagnostic sensitivity of the method from 87 % to 95.1 %, and its specificity from 78.8 % to 93.9 %.

Conclusions

Conclusions. We revealed the most informative pairs of miRNAs in the cervical epithelium, as an analysis of their expression expanded the possibilities of liquid-based cytology both as a method for diagnosing CC and as a method for the differential diagnosis between CC and HSIL.

миРНК-20амиРНК-21миРНК-23bмиРНК-375экспрессиярак шейки матки (РШМ)плоскоклеточные интраэпителиальные поражения (ПИП)жидкостная цитология (ЖЦ)miRNA-20amiRNA-21miRNA-23bmiRNA-375expressioncervical cancer (CC)squamous intraepithelial lesions of the cervix (SIL)liquid-based cytology (LBC)Данная работа была проведена в рамках государственного задания: «Исследование аберрантного регулирования транскрипционной активности паттерна генов при развитии малигнизации тканей различных нозологий». Выражаем слова благодарности заведующей лаборатории молекулярной онкологии Тимошкиной Наталье Николаевне – редактирование статьи, переводчику Олесе Андреевне Оссовской – перевод текста рукописи на английский язык.. The study was conducted as part of the state assignment: “Study of aberrant regulation of transcriptional activity of the gene pattern in the development of various tissue malignancies”. We thank Natalia N. Timoshkina, Head of Laboratory of Molecular Oncology, for the manuscript editing. We also thank Olesya A. Ossovskaya, translator, for the help with the manuscript translation in English.ReferencesWilliamson A-L. The Interaction between Human Immunodeficiency Virus and Human Papillomaviruses in Heterosexuals in Africa. J Clin Med. 2015 Apr 2;4(4):579–592. https://doi.org/10.3390/jcm4040579Williamson A-L. The Interaction between Human Immunodeficiency Virus and Human Papillomaviruses in Heterosexuals in Africa. J Clin Med. 2015 Apr 2;4(4):579–592. https://doi.org/10.3390/jcm4040579Брико Н.И., Секачева М.И., Лопухов П.Д., Кобзев Г.С., Каприн А.Д., Новикова Е.Г. и др. Клинико-эпидемиологические особенности проявлений папилломавирусной инфекции на примере рака шейки матки и аногенитальных (венерических) бородавок. Вестник Российской академии медицинских наук. 2020;75(1):77–82. https://doi.org/10.15690/vramn1212Briko NI, Sekacheva MI, Lopukhov PD, Kobzev GS, Kaprin AD, Novikova EG, et al. Clinical and epidemiological features of papillomavirus infection manifestations on the example of cervical cancer and genital warts. Annals of the Russian academy of medical sciences. 2020;75(1):77–82. https://doi.org/10.15690/vramn1212Bray F, Ferlay J, Soerjomataram I, Siegel RL, Torre LA, Jemal A. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 2018 Nov;68(6):394–424. https://doi.org/10.3322/caac.21492Bray F, Ferlay J, Soerjomataram I, Siegel RL, Torre LA, Jemal A. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 2018 Nov;68(6):394–424. https://doi.org/10.3322/caac.21492Arbyn M, Weiderpass E, Bruni L, de Sanjosé S, Saraiya M, Ferlay J, et al. Estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2018: a worldwide analysis. Lancet Glob Health. 2020 Feb;8(2):e191–203. https://doi.org/10.1016/S2214-109X(19)30482-6Arbyn M, Weiderpass E, Bruni L, de Sanjosé S, Saraiya M, Ferlay J, et al. Estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2018: a worldwide analysis. Lancet Glob Health. 2020 Feb;8(2):e191–203. https://doi.org/10.1016/S2214-109X(19)30482-6Состояние онкологической помощи населению России в 2019 году. Под ред. А.Д.Каприна, В.В.Старинского, А.О.Шахзадовой. М.: МНИОИ им. П.А. Герцена − филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2020, 239 с.The state of cancer care in Russia in 2019. Ed. by A.D.Kaprin, V.V.Starinsky, A.O.Shakhzadova. M.: P.A.Herzen Moscow State Medical Research Institute-branch of the Federal State Budgetary Institution "NMIC of Radiology" of the Ministry of Health of Russia, 2020, 239 p.Елгина С.И., Золоторевская О.С., Разумова В.А., Кратовский А.Ю. Применение жидкостной цитологии в ранней диагностике рака шейки матки. Мать и дитя в Кузбассе. 2018;(3(74)).Elgina SI, Zolotarevskaya OS, Razumova VA, Kratovskiy AYu. Application of liquid-based cytology in diagnosing cervical pathology. Mother and Child in Kuzbass. 2018;(3(74)):46–49. (In Russian).Казаишвили Т.Н. Ранняя диагностика рака шейки матки методом жидкостной цитологии. I Национальный конгресс «Онкология репродуктивных органов от профилактики и раннего выявления к эффективному лечению»; 19–21 мая 2016 года, Москва. Доступно по: https://www.rpmj.ru/rpmj/article/viewFile/131/132. Дата обращения: 01.11.2020Kazaishvili T. N. Early diagnosis of cervical cancer by liquid cytology. I National Congress "Oncology of the reproductive Organs from prevention and early detection to effective treatment"; 19– 21 May 2016, Moscow. Available at: https://www.rpmj.ru/rpmj/article/viewFile/131/132. Accessed: 01.11.2020. (In Russian).Brase JC, Wuttig D, Kuner R, Sültmann H. Serum microRNAs as non-invasive biomarkers for cancer. Mol Cancer. 2010 Nov 26;9:306. https://doi.org/10.1186/1476-4598-9-306Brase JC, Wuttig D, Kuner R, Sültmann H. Serum microRNAs as non-invasive biomarkers for cancer. Mol Cancer. 2010 Nov 26;9:306. https://doi.org/10.1186/1476-4598-9-306He L, Thomson JM, Hemann MT, Hernando-Monge E, Mu D, Goodson S, et al. A microRNA polycistron as a potential humanoncogene. Nature. 2005 Jun 9;435(7043):828–833. https://doi.org/10.1038/nature03552He L, Thomson JM, Hemann MT, Hernando-Monge E, Mu D, Goodson S, et al. A microRNA polycistron as a potential human oncogene. Nature. 2005 Jun 9;435(7043):828–833. https://doi.org/10.1038/nature03552Pritchard CC, Cheng HH, Tewari M. MicroRNA profiling: approaches and considerations. Nat Rev Genet. 2012 Apr 18;13(5):358–369. https://doi.org/10.1038/nrg3198Pritchard CC, Cheng HH, Tewari M. MicroRNA profiling: approaches and considerations. Nat Rev Genet. 2012 Apr 18;13(5):358–369. https://doi.org/10.1038/nrg3198Kroh EM, Parkin RK, Mitchell PS, Tewari M. Analysis of circulating microRNA biomarkers in plasma and serum using quantitative reverse transcription-PCR (qRT-PCR). Methods. 2010 Apr;50(4):298–301. https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2010.01.032Kroh EM, Parkin RK, Mitchell PS, Tewari M. Analysis of circulating microRNA biomarkers in plasma and serum using quantitative reverse transcription-PCR (qRT-PCR). Methods. 2010 Apr;50(4):298–301. https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2010.01.032Кит О.И., Водолажский Д.И., Тимошкина Н.Н. Роль микроРНК в регуляции сигнальных путей при меланоме. Молекулярная медицина. 2017;15(1):15–23.Kit OI, Vodolazhsky DI, Timoshkina NN. The role of microRNAs in the regulation of melanoma signaling pathways. Molecular Medicine. 2017;15(1):15–23. (In Russian).Solayman MHM, Langaee T, Patel A, El-Wakeel L, El-Hamamsy M, Badary O, et al. Identification of Suitable Endogenous Normalizers for qRT-PCR Analysis of Plasma microRNA Expression in Essential Hypertension. Mol Biotechnol. 2016 Mar;58(3):179– 187. https://doi.org/10.1007/s12033-015-9912-zSolayman MHM, Langaee T, Patel A, El-Wakeel L, El-Hamamsy M, Badary O, et al. Identification of Suitable Endogenous Normalizers for qRT-PCR Analysis of Plasma microRNA Expression in Essential Hypertension. Mol Biotechnol. 2016 Mar;58(3):179–187. https://doi.org/10.1007/s12033-015-9912-zFang Q-Y, Deng Q-F, Luo J, Zhou C-C. MiRNA-20a-5p accelerates the proliferation and invasion of non-small cell lung cancer by targeting and downregulating KLF9. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020 Mar;24(5):2548–2556. https://doi.org/10.26355/eurrev_202003_20522Fang Q-Y, Deng Q-F, Luo J, Zhou C-C. MiRNA-20a-5p accelerates the proliferation and invasion of non-small cell lung cancer by targeting and downregulating KLF9. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020 Mar;24(5):2548–2556. https://doi.org/10.26355/eurrev_202003_20522Karimkhanloo H, Mohammadi-Yeganeh S, Ahsani Z, Paryan M. Bioinformatics prediction and experimental validation of microRNA-20a targeting Cyclin D1 in hepatocellular carcinoma. Tumour Biol. 2017 Apr;39(4):1010428317698361. https://doi.org/10.1177/1010428317698361Karimkhanloo H, Mohammadi-Yeganeh S, Ahsani Z, Paryan M. Bioinformatics prediction and experimental validation of microRNA-20a targeting Cyclin D1 in hepatocellular carcinoma. Tumour Biol. 2017 Apr;39(4):1010428317698361. https://doi.org/10.1177/1010428317698361Li J, Huang H, Sun L, Yang M, Pan C, Chen W, et al. MiR-21 indicates poor prognosis in tongue squamous cell carcinomas as an apoptosis inhibitor. Clin Cancer Res. 2009 Jun 15;15(12):3998– 4008. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-08-3053Li J, Huang H, Sun L, Yang M, Pan C, Chen W, et al. MiR-21 indicates poor prognosis in tongue squamous cell carcinomas as an apoptosis inhibitor. Clin Cancer Res. 2009 Jun 15;15(12):3998–4008. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-08-3053Yao T, Lin Z. MiR-21 is involved in cervical squamous cell tumorigenesis and regulates CCL20. Biochim Biophys Acta. 2012 Feb;1822(2):248–260. https://doi.org/10.1016/j.bbadis.2011.09.018Yao T, Lin Z. MiR-21 is involved in cervical squamous cell tumorigenesis and regulates CCL20. Biochim Biophys Acta. 2012 Feb;1822(2):248–260. https://doi.org/10.1016/j.bbadis.2011.09.018Wang W, Wang Y, Liu W, van Wijnen AJ. Regulation and biological roles of the multifaceted miRNA-23b (MIR23B). Gene. 2018 Feb 5;642:103–109. https://doi.org/10.1016/j.gene.2017.10.085Wang W, Wang Y, Liu W, van Wijnen AJ. Regulation and biological roles of the multifaceted miRNA-23b (MIR23B). Gene. 2018 Feb 5;642:103–109. https://doi.org/10.1016/j.gene.2017.10.085Allah AW, Yahya M, Elsaeidy KS, Alkanj S, Hamam K, El-Saady M, et al. Clinical assessment of miRNA-23b as a prognostic factor for various carcinomas: A systematic review and meta-analysis. Meta Gene. 2020;24:100651. https://doi.org/10.1016/j.mgene.2020.100651Allah AW, Yahya M, Elsaeidy KS, Alkanj S, Hamam K, El-Saady M, et al. Clinical assessment of miRNA-23b as a prognostic factor for various carcinomas: A systematic review and meta-analysis. Meta Gene. 2020;24:100651. https://doi.org/10.1016/j.mgene.2020.100651Ali OS, Shabayek MI, Seleem MM, Abdelaziz HG, Makhlouf DO. MicroRNAs 182 and 375 Sera Expression as Prognostic Biochemical Markers in Breast Cancer. Clin Breast Cancer. 2018 Dec;18(6):e1373–e1379. https://doi.org/10.1016/j.clbc.2018.07.020Ali OS, Shabayek MI, Seleem MM, Abdelaziz HG, Makhlouf DO. MicroRNAs 182 and 375 Sera Expression as Prognostic Biochemical Markers in Breast Cancer. Clin Breast Cancer. 2018 Dec;18(6):e1373–e1379. https://doi.org/10.1016/j.clbc.2018.07.020Wu S, Chen H. Anti-Condyloma acuminata mechanism of microRNAs-375 modulates HPV in cervical cancer cells via the UBE3A and IGF-1R pathway. Oncol Lett. 2018 Sep;16(3):3241– 3247. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8983Wu S, Chen H. Anti-Condyloma acuminata mechanism of microRNAs-375 modulates HPV in cervical cancer cells via the UBE3A and IGF-1R pathway. Oncol Lett. 2018 Sep;16(3):3241–3247. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8983Shen J, Stass SA, Jiang F. MicroRNAs as potential biomarkers in human solid tumors. Cancer Lett. 2013 Feb 28;329(2):125– 136. https://doi.org/10.1016/j.canlet.2012.11.001Shen J, Stass SA, Jiang F. MicroRNAs as potential biomarkers in human solid tumors. Cancer Lett. 2013 Feb 28;329(2):125–136. https://doi.org/10.1016/j.canlet.2012.11.001Роспатент. Зарегистрировано 19.12.2019. Свидетельство о государственной регистрации № RU2709651С1. Кит О.И., Тимощкина Н.Н., Пушкин А.А., Кутилин Д.С., Росторгуев Э.Е., Кузнецова Н.С. Способ дифференциальной диагностики глиом на основании анализа экспрессии генов и микроРНК.Ruspatent. Registered on 19.12.2019. Certificate of state registration No. RU2709651C1. Kit OI, Timoshkina NN, Pushkin AA, Kutilin DS, Rostorguev EE, Kuznetsova NS. Method for differential diagnosis of gliomas based on analysis of gene expression and micro-RNA. (In Russian).Soloman D. The 1988 Bethesda system for reporting cervical/vaginal cytologic diagnoses: Developed and approved at the national cancer institute workshop in Bethesda, MD, December 12–13, 1988. Diagnostic Cytopathology. 1989;5(3):331–334. https://doi.org/10.1002/dc.2840050318Soloman D. The 1988 Bethesda system for reporting cervical/vaginal cytologic diagnoses: Developed and approved at the national cancer institute workshop in Bethesda, MD, December 12–13, 1988. Diagnostic Cytopathology. 1989;5(3):331–334. https://doi.org/10.1002/dc.2840050318Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 2001 Dec;25(4):402–408. https://doi.org/10.1006/meth.2001.1262Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 2001 Dec;25(4):402–408. https://doi.org/10.1006/meth.2001.1262Pfaffl MW. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR. Nucleic Acids Res. 2001 May 1;29(9):e45. https://doi.org/10.1093/nar/29.9.e45Pfaffl MW. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR. Nucleic Acids Res. 2001 May 1;29(9):e45. https://doi.org/10.1093/nar/29.9.e45Mulhollanda R, Yousef HMSA, Laing M, Gupta R, Leung EYL. Comparison of women with possible endocervical and non-cervical glandular neoplasms detected in liquid-based cervical cytology- incidence, clinical characteristics and outcomes: A cohort study. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2021 Feb;257:100–105. https://doi.org/10.1016/j.ejogrb.2020.12.025Mulhollanda R, Yousef HMSA, Laing M, Gupta R, Leung EYL. Comparison of women with possible endocervical and non-cervical glandular neoplasms detected in liquid-based cervical cytology- incidence, clinical characteristics and outcomes: A cohort study. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2021 Feb;257:100– 105. https://doi.org/10.1016/j.ejogrb.2020.12.025Jihad NA, Naif HM. Evaluation of microRNA-20, -21 and -143 expression in human papilloma virus induced premalignant and malignant cervical lesions. Gene Reports. 2020;20:100702. https://doi.org/10.1016/j.genrep.2020.100702Jihad NA, Naif HM. Evaluation of microRNA-20, -21 and -143 expression in human papilloma virus induced premalignant and malignant cervical lesions. Gene Reports. 2020;20:100702. https://doi.org/10.1016/j.genrep.2020.100702Nebgen DR, Lu KH, Bast RC. Novel Approaches to Ovarian Cancer Screening. Curr Oncol Rep. 2019 Jul 26;21(8):75. https://doi.org/10.1007/s11912-019-0816-0Nebgen DR, Lu KH, Bast RC. Novel Approaches to Ovarian Cancer Screening. Curr Oncol Rep. 2019 Jul 26;21(8):75. https://doi.org/10.1007/s11912-019-0816-0

The authors declare that there are no conflicts of interest present.