Особенности экспрессии иммуногистохимических маркеров при локальном и генерализованном светлоклеточном раке почки

Цель исследования. Провести сравнительный анализ экспрессии следующих маркеров: Ki‑67, циклин D1, Е‑кадгерин, CD44, MMP‑9, VEGF, P53, виментин в опухолевой ткани почки при светлоклеточном раке в зависимости от распространенности опухолевого процесса.

Материалы и методы. Материалом для исследования послужил операционный материал 100 больных светлоклеточным раком почки, находившихся на лечении в ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии» МЗ РФ с 2015 по 2018 г. У 50 пациентов диагностирован локальный рак (Т1–3 а N0 М0 ), у 50 – генерализованный (Т1–4N0 М1 ). Для иммуногистохимического (ИГХ) исследования материал фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 24 ч и заключали в парафин. Депарафинизацию и восстановление антигенной активности материала проводили в РТ-модуле (Thermo Fisher Scientific) с использованием Трис-буфера pH=9, в течение 20 мин при 98 °C. Постановку ИГХ-реакции проводили в иммуногистостейнере Autostainer 480S (Thermo Fisher Scientific). Применяли систему детекции UltraVision Quanto Detection System (Thermo Fisher Scientific), хромоген – DAB. Использованные антитела: E‑кадгерин (EP700Y) Cell Marque, 1:100; CD 44 (EPR1013Y) Cell Marque 1:150; Ki‑67 (SP6) Spring Bio, 1:200; P53 (DO‑7) Cell Marque, 1:200; циклин D1 (EP12) Dako, 1:200; VEGF Thermo Fisher, 1:100; Vimentin (V9) Dako, 1:150; MMP‑9 (EP100902) Epitomics, 1:100. Результаты реакций с маркерами оценивали, подсчитывая количество окрашенных клеток в каждом 3‑м поле зрения всего препарата при увеличении объектива ×200 в микроскопе AXIO Scope.A1 (Carl Zeiss). Полученные результаты выражали в процентах – доля окрашенных клеток по отношению ко всем клеткам опухоли в поле зрения. Для статистической обработки результатов использовали параметрические методы статистики. Достоверность разницы между двумя средними определяли по значению t‑критерия Стьюдента для несвязанных совокупностей.

Результаты. При светлоклеточном раке почки в целом отмечался невысокий уровень пролиферативной активности, однако при генерализованном, по сравнению с локальным (8±0,5% и 5±0,6% соответственно), он достоверно выше (Р<0,05) также при генерализованном раке наблюдалась гиперэкспрессия циклина D1–70±3,9%, против 14,4±2,3% при локальных стадиях, Р<0,05. При генерализованном раке почки по сравнению с локальным более выражены процессы эпителиально-мезенхимальной трансформации (достоверное усиление экспрессии виментина на 28% и CD44 на 16,6% (Р<0,05), снижение экспрессии Е‑кадгерина на 24% (Р<0,05), а также активация процессов неоангиогенеза (достоверное повышение уровня экспрессии VEGF на 32%, (Р<0,05)). Белок Р53 отсутствовал в клетках локального рака почки и был крайне низким при генерализованном – 3,8±0,7%. Один из основных маркеров деградации внеклеточного матрикса MMP‑9 был примерно на одинаковом уровне при обеих стадиях: при локальном – 50±6% и 49,6±7,2% при генерализованном, разница показателей недостоверна (Р<0,05).

Заключение. Прогрессия светлоклеточного рака почки от локальной формы к генерализованной сопровождается гиперэкспрессией циклина D1, снижением экспрессии Е-кадгерина при одновременном увеличении экспрессии виментина (нарастание признаков эпителиально-мезенхимальной трансформации), повышением экспрессии CD44 и VEGF.

1. Ващенко Л.Н., Карнаухов Н.С., Гудцкова Т.Н., Кварчия М.В. Сопоставление уровня экспрессии маркеров пролиферации Ki 67 и циклина D1 в тройном негативном раке молочной железы с различным андрогеновым статусом. Современные проблемы науки и образования. 2018;(4):146.

2. Глушанкова Н.А., Житняк И.Ю., Рубцова С.Н. Роль эпителиально-мезенхимального перехода в опухолевой прогрессии. Биохимия. 2018; 83(12):1802–1811. https://doi.org/10.1134/ S0320972518120059

3. Basakran NS. CD44 as a potential diagnostic tumor marker. Saudi Med J. 2015 Mar; 36(3):273–279. https://doi. org/10.15537/smj.2015.3.9622

4. Pestell RG. New roles of cyclin D1. Am J Pathol. 2013 Jul; 183(1):3–9.

5. Кит О.И., Франциянц Е.М., Шевченко А.Н., Бреус А.А., Погорелова Ю.А., Нескубина И.В. Уровень некоторых факторов роста семейства VEGF при светлоклеточном раке почки. Известия высших учебных заведений северо-кавказский регион серия: естественные науки. 2018; 1(197):124–129.

6. Lin J, Ding D. The prognostic role of the cancer stem cell marker CD44 in ovarian cancer: a meta-analysis. Cancer Cell Int. 2017 Jan 5; 17:8. https://doi.org/10.1186/s12935–016–0376–4

7. Morath I, Hartmann TN, Orian-Rousseau V. CD44: More than a mere stem cell marker. Int J Biochem Cell Biol. 2016; 81(Pt A):166–173. https://doi.org/10.1016/j.biocel.2016.09.009

8. Basakran NS. CD44 as a potential diagnostic tumor marker. Saudi Med J. 2015 Mar; 36(3):273–9. https://doi. org/10.15537/smj.2015.3.9622

9. Morath I, Hartmann TN, Orian-Rousseau V. CD44: More than a mere stem cell marker. Int J Biochem Cell Biol. 2016; 81(Pt A):166–173. https://doi.org/10.1016/j.biocel.2016.09.009

10. Lin J, Ding D. The prognostic role of the cancer stem cell marker CD44 in ovarian cancer: a meta-analysis. Cancer Cell Int. 2017; 17:8. https://doi.org/10.1186/s12935–016–0376–4

11. Бреус А.А., Франциянц Е.М., Кит О.И., Шевченко А.Н., Нескубина И.В., Дженкова Е.А. и др. Половые различия в содержании компонентов инсулиноподобного сигнального пути в тканях почки при локальном и генерализованном светлоклеточном раке почки. Современные проблемы науки и образования. 2019;(5):81.

12. Нефедова Н.А., Давыдова С.Ю. Роль сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и гипоксия-индуцибельного фактора (HIF) в опухолевом ангиогенезе. Cовременные проблемы науки и образования. 2015;(3):51.

13. Гервальд В.Я., Сеченов Е.И., Черданцева Т.М., Бобров И.П., Климачев В.В., Авдалян А.М. и др. Экспрессия маркера пролиферации Ki 67 при раке почки: клинико-морфологические сопоставления. Сибирский онкологический журнал. 2012;(S1):43–44.

14. Li Z, Liu J, Zhang X, Fang L, Zhang C, Zhang Z, et al. Prognostic Significance of Cyclin D1 Expression in Renal Cell Carcinoma: a Systematic Review and Meta-analysis. Pathol Oncol Res. 2019 Nov 20. https://doi.org/10.1007/s12253–019–00776–0

15. Pestell RG. New roles of cyclin D1. Am J Pathol. 2013 Jul; 183(1):3–9. https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2013.03.001

16. Morel A P, Hinkal GW, Thomas C, Fauvet F, Courtois-Cox S, Wierinckx A, et al. EMT inducers catalyze malignant transformation of mammary epithelial cells and drive tumorigenesis towards claudin-low tumors in transgenic mice. PLoS Genet. 2012; 8(5): e1002723. https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002723

17. Roy SS, Gonugunta VK, Bandyopadhyay A, Rao MK, Goodall GJ, Sun L Z, et al. Significance of PELP1/HDAC2/miR 200 regulatory network in EMT and metastasis of breast cancer. Oncogene. 2014 Jul 10; 33(28):3707–3716. https://doi.org/10.1038/onc.2013.332

18. Ващенко Л.Н., Карнаухов Н.С., Гудцкова Т.Н., Кварчия М.В. Сопоставление уровня экспрессии маркеров пролиферации Ki 67 и циклина D1 в тройном негативном раке молочной железы с различным андрогеновым статусом. Современные проблемы науки и образования. 2018;(4):146.

19. Кузнецов М.Б., Колобов А.В. Исследование влияния антиангиогенной монотерапии на прогрессию гетерогенной опухоли с помощью методов математического моделирования. Компьютерные исследования имоделирование. 2017; 9(3):487– 501. https://doi.org/10.20537/2076–7633–2017–9-3–487–501

20. Скворцов В.А., Манихас Г.М. Циклин D1 и его прогностическая значимость в планировании эндокринной терапии у женщин постменопаузального возраста при раке молочной железы. Врач-аспирант. 2012; 50(1.3):401–406.